在生物制藥、精細化工與天然產物提取領域,工業(yè)級層析柱長期運行后易因樣品殘留、雜質吸附或微生物滋生導致柱效下降、背壓升高與峰形拖尾??茖W、系統(tǒng)的清洗
工業(yè)級層析柱是恢復柱性能、延長使用壽命、保障批次間一致性的關鍵。

1、清洗前準備
關閉系統(tǒng)泵與閥門,卸除層析柱壓力。確認清洗溶劑與柱填料(如瓊脂糖、硅膠、聚合物)的兼容性,避免溶脹或塌陷。準備去離子水、緩沖液、再生劑與消毒液,連接清洗管路,確保流向與層析方向一致(通常為正向沖洗)。
2、初步沖洗
用5-10倍柱體積(CV)的去離子水低流速沖洗,去除鹽類、緩沖液及水溶性雜質。觀察流出液澄清度,直至電導率接近進水值。此步可有效降低后續(xù)清洗劑消耗。
3、去蛋白清洗
針對蛋白類樣品殘留,使用0.5-1MNaOH溶液循環(huán)清洗1-2小時(瓊脂糖基質耐受性強,硅膠柱禁用)。NaOH可水解蛋白質、滅活內毒素并去除脂類。流速控制在操作上限的50%以下,避免壓降突增。結束后用去離子水沖洗至中性。
4、去脂與疏水雜質清洗
對于疏水性雜質或脂類殘留,采用30-70%乙醇或異丙醇清洗2-3CV。部分系統(tǒng)可用含0.1-0.5%TritonX-100的緩沖液短時沖洗,增強去污力。注意有機溶劑對密封圈的溶脹影響,清洗后充分水化。
5、在位消毒(SIP)
在GMP環(huán)境中,定期執(zhí)行在位消毒。常用0.5-1.0MNaOH溶液循環(huán)1小時,或200ppm次氯酸鈉沖洗30分鐘。結束后用大量去離子水沖洗至無殘留,防止氧化損傷填料。
6、再生與平衡
清洗后,用初始平衡緩沖液(如20mMPBS)沖洗5-10CV,使填料恢復離子狀態(tài)與pH環(huán)境。檢測流出液pH與電導穩(wěn)定,方可重新上樣。